Efecto de inhibidores fotosintéticos sobre los niveles de RNA mensajero de la diaciglicerol aciltransferasa-3 y sobre la acumulación de triacilgliceroles en el alga verde Chlamydomonas reinhardtii

Abstract

Se analizaron los efectos de inhibidores del transporte de electrones fotosintético sobre los niveles de RNA mensajero de la diaciglicerol aciltransferasa-3 (DGAT3) y sobre la acumulación de triacilgliceroles (TAG) en el alga verde Chlamydomonas reinhardtii. Se utilizaron los inhibidores: Diurón ó (3-(3,4-dichlorophenyl)-1,1-dimethylurea) (DCMU, concentración final 10 micromolar), 2,5-Dibromo-6-isopropil-3-metil-1,4-benzoquinona (DBMIB, concentración final 10 micromolar) y Dicloruro de N,N′-dimetil-4,4′-bipiridilo (paraquat, concentración final 50 micromolar). Los inhibidores fueron agregados por separado a cultivos de C. reihardtii a una densidad celular de 3 millones de células por mililitro y mantenidos hasta 3 horas en luz continua (4.500 lux). Alícuotas de los cultivos fueron cosechadas mediante centrifugación y utilizados para la extración de ARN total y lípidos. Los ARN totales fueron utilizados para la estimación de los niveles relativos de mensajero de la DGAT3 mediante la técnica de RT-qPCR. Los lípidos fueron separados en cromatografía de capa delgada. Los spots correspondientes a los TAG fueron raspados y cuantificados mediante el método colorimétrico de GPO-PAP. Los datos de ARN se muestran como la variación relativa entre las muestras con y sin inhibidor. Los datos de TAG se presentan como microgramos por millón de células. Todos los experimentos fueron hechos al menos por triplicado; los datos fueron analizados estadísticamente. Se presenta un archivo excel con de las mediciones realizadas.