Datos de investigación
Estudio in vitro del efecto de extracto de Lúpulo sobre células endoteliales EA.hy926
Publicador:
Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas
Fecha de depósito:
03/09/2024
Fecha de creación:
01/11/2019
Clasificación temática:
Resumen
La osteoporosis es una enfermedad ósea común que puede causar fracturas y resulta en elevados costos económicos y médicos. La angiogénesis, el proceso de formación de nuevos vasos sanguíneos, es crucial para la reparación ósea, ya que proporciona nutrientes y células al área afectada y regula el metabolismo óseo mediante factores de crecimiento liberados por células endoteliales. En mujeres posmenopáusicas, la deficiencia de estrógenos contribuye significativamente a la osteoporosis al debilitar los huesos y afectar negativamente el sistema vascular. Los estrógenos promueven la formación ósea, limitan la resorción ósea y tienen efectos positivos sobre el endotelio vascular, facilitando la proliferación y migración de células endoteliales necesarias para la angiogénesis. Aunque la terapia de reemplazo hormonal (TRH) ha sido eficaz en la prevención de fracturas, sus efectos secundarios graves han impulsado la búsqueda de alternativas más seguras. Los fitoestrógenos, como la 8-prenilnaringenina (8-PN), que se encuentra en plantas como el lúpulo, pueden ofrecer una solución al imitar los efectos de los estrógenos. Estos compuestos pueden promover la angiogénesis y mejorar la salud ósea al compensar parcialmente la deficiencia de estrógenos, sin los efectos adversos de la TRH. Utilizar extractos vegetales puede permitir una acción sinérgica de múltiples compuestos activos, potencialmente reduciendo la necesidad de dosis elevadas y evitando efectos secundarios.
Métodos
Polvo de lúpulo (Humulus lupulus L., Cannabaceae) para cervecería fue producido en la ciudad de El Bolsón, Argentina (cosecha 2019). Se preparó una tintura mediante la maceración del polvo (10 g en 100 ml de alcohol 70◦, 10% p/V) durante al menos 48 h. Durante el proceso de maceración, se mantuvo a temperatura ambiente, protegido de la luz, y se agitó con frecuencia. Una vez obtenida la tintura, se midió un pequeño volumen y se secó en un horno hasta alcanzar un peso constante para calcular el rendimiento. Cultivos celulares: Las células endoteliales EA.hy 926 se mantuvieron en medio de cultivo celular modificado de Eagle de Dulbecco (DMEM, Gibco, ThermoFisher-USA) suplementado con 10% de suero fetal bovino (FBS, Internegocios SA-Argentina), penicilina (100 IU/L) y estreptomicina (100 mg/L) (medio basal) a 37 °C, en una atmósfera humidificada con 5 %CO2 (condiciones basales). Las CPMO fueron plaquedas en placas de 24, 48 o 96 pocillos según experimentos y se incubaron con distintas soluciones seriadas del extracto del lúpulo preparadas en medio de cultivo DMEM sin FBS para evaluar el comportamiento de las células. Además, para conocer posibles mecanismos de acción de los extractos de lúpulo en las células, estas se cultivaron en ausencia o presencia de 10 μM PD 98059 (Sigma Aldrich), un inhibidor de MAPK. Proliferación celular: Se cultivaron 2.5 × 10⁴ células EA.hy 926 y se sometieron a diferentes condiciones experimentales para evaluar la proliferación luego de 24 y 48hs. Luego del tiempo deseado se realizó la tinción con cristal violeta (Anedra-Argentina) y su absorbancia se leyó a 540 nm utilizando un lector de placas Elisa automático (Infinite® F50, Suiza). Produccion de NO El efecto del extracto de lúpulo sobre la actividad angiogénica endotelial se evaluó a través de la producción de óxido nítrico (NO). Las células fueron incubadas con medio de cultivo RPMI con y sin lúpulo y o PD98056 y luego de 48hs, el NO producido y liberado en el medio de cultivo se evaluó mediante la reacción de Griess, en la cual se usa ácido sulfánico (Merck) como agente diazotizante y N-1-naftiletilendiamina (Sigma-Aldrich) como agente de acoplamiento. la concentración de NO se evaluó por absorbancia a 550 nm contra un blanco preparado con medio no condicionado.
Palabras clave:
osteoporosis,
Estrogeno,
angiogénesis,
Lúpulo
Alcance geográfico
.
Identificador del recurso
Colecciones
Datos de Investigación(CCT - LA PLATA)
Datos de Investigación de CTRO.CIENTIFICO TECNOL.CONICET - LA PLATA
Datos de Investigación de CTRO.CIENTIFICO TECNOL.CONICET - LA PLATA
Citación
Wanionok, Nahuel Ezequiel; Colareda, German Andres; Fernández, Juan Manuel; (2024): Estudio in vitro del efecto de extracto de Lúpulo sobre células endoteliales EA.hy926. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. (dataset). http://hdl.handle.net/11336/243452
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