Evaluación de la muerte neuronal mediante TUNEL en los cultivos neuro-gliales de 6 días rd1 y rd1 pretratados con medio condicionado enriquecido en matriz extracelular (particularmente con SPARC, MC-MEC)

Abstract

Evaluación de muerte neuronal mediante la técnica TUNEL en cultivos neuro-gliales de 6 días obtenidos de retinas rd1. Se evaluó la presencia de ADN fragmentado mediante el ensayo de TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick-end labeling assay), con el kit de detección ApopTag®, en los cultivos rd1 y rd1 pretratados con MC-MEC. Este ensayo marca los extremos 3’-hidroxilo terminales en ADN fragmentado, para detectar fragmentación del ADN a nivel celular. Los núcleos fueron contrastados con DAPI dilución 1 ug/ul durante 10 minutos. La cuantificación se realizó sobre imágenes adquiridas con un objetivo 40X, tomando 10 campos aleatorios por cápsula, y analizando tres cápsulas por condición para cada experimento.