Nebulizacion de anticuerpos anti-influenza

Abstract

La inmunización pasiva apunta a reforzar la respuesta inmunitaria específica del individuo contra un patógeno determinado. Utilizada en el tratamiento de infecciones respiratorias, es capaz de reducir significativamente la mortalidad y los requisitos de ventilación mecánica en pacientes con infecciones virales respiratorias agudas graves, sin efectos adversos graves. La administración de anticuerpos específicos por inhalación, permite el acceso directo al tracto respiratorio reduciendo los efectos secundarios sistémicos a dosis menores. Previamente describimos el efecto profiláctico de la administración intranasal de plasma inmune contra H1N1 y de nanoanticuerpos específicos. En este trabajo investigamos si la administración local de anticuerpos neutralizantes, permite lograr una distribución homogénea en el tracto respiratorio para reforzar la respuesta inmune frente a la influenza A H1N1, comparando el rendimiento de dos tecnologías de nebulización JET y MESH. En primer lugar, se analizó el comportamiento aerodinámico de una formulación nebulizable de plasma de llama hiperinmune:buffer fosfato pH 7.4 (1:5) contra H1N1. Con un sistema de impacto en cascada (NGI-Coplay), secciones con diferente tamaño de poro permitieron la clasificación de las gotas nebulizadas, donde particularmente entre las secciones 3 y 7, un diámetro aerodinámico entre 3 y 5 µm permitirá alcanzar la profundidad pulmonar. Mediante la lectura de absorbancia (280 nm) del material colectado se calcularon los parámetros aerodinámicos dando como resultado una correcta aerosolización y deposición de las partículas nebulizadas. La cuantificación de proteínas por el método de Bradford demostró mayor porcentaje de recuperación (3%) de la formulación nebulizada con la tecnología JET. Para el análisis de funcionalidad se determinó el título por ELISA de hemaglutinina recombinante (HA) de todas las secciones colectadas luego de la nebulización. Como resultado se observó para ambas tecnologías una detección efectiva de anticuerpos señalando la estabilidad del plasma luego de la nebulización. A su vez, el título detectado dentro de las últimas secciones de interés (6 y 7) fue mayor para la tecnología JET que para MESH. En conjunto, estos resultados indican por un lado, que la formulación plasma de llama:buffer pudo ser nebulizada logrando una óptima distribución pulmonar sin perder la capacidad de reconocer el antígeno. Por otro lado, que el uso de la tecnología JET alcanzó un mejor rendimiento con respecto a MESH, en cuanto a la cantidad de proteínas colectadas y el título de anticuerpo detectado.